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生物通報(bào)道：在使用殺傷性武器的時(shí)候，不傷及無(wú)辜很重要，對(duì)于RNA干涉（RNAi）來(lái)說(shuō)也是如此。RNAi是一種常用的基因失活工具，它的主要缺陷在于會(huì)引起序列特異性的脫靶效應(yīng)。這樣的脫靶效應(yīng)很難預(yù)測(cè)，因?yàn)閟iRNA能夠影響與它部分互補(bǔ)的序列，像miRNA那樣抑制基因的表達(dá)。要減少脫靶效應(yīng)，可以將針對(duì)同一mRNA的不同siRNA混合起來(lái)使用。這些siRNA作用于同一個(gè)目標(biāo)，每種siRNA的濃度得以降低，稀釋了各自的脫靶效應(yīng)。然而，這一策略在實(shí)際操作中面臨著兩個(gè)問(wèn)題。其一，目前“Sm...

環(huán)狀RNA（CircularRNA,CircRNA），是一種廣泛存在于生物體內(nèi)的特殊RNA分子，與線性RNA相比，穩(wěn)定性高，現(xiàn)已證實(shí)CircRNA廣泛存在于生物體內(nèi)，與線性RNA相比，穩(wěn)定性高，對(duì)microRNA具有重要調(diào)控作用。CircRNA于2012年被科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，2013年Nature雜志報(bào)道兩篇關(guān)于CircRNA的研究成果，由此關(guān)于CircRNA的研究開始引起科學(xué)家的重視。利用高通量測(cè)序技術(shù)可鑒定CircRNA在生物樣本中的種類、表達(dá)豐度及結(jié)構(gòu)，對(duì)CircRNA的研究...

在基因組測(cè)序中，PCR擴(kuò)增似乎是繞不過(guò)去的一步。然而，PCR也帶來(lái)一些問(wèn)題，包括不均勻擴(kuò)增，導(dǎo)致某些序列的比例過(guò)高。對(duì)目前的新一代測(cè)序（NGS）平臺(tái)而言，測(cè)序某些堿基組成上存在嚴(yán)重偏向的基因組區(qū)域仍是一大挑戰(zhàn)。在GEN雜志上，PatriciaFitzpatrickDimond博士介紹了PCR-Free的基因組測(cè)序。文庫(kù)制備的變革2009年，Sanger研究院的IwankaKozarewa博士及其同事介紹了一種無(wú)需擴(kuò)增的Illumina文庫(kù)制備方法（NatureMethods2...

一個(gè)由德國(guó)、瑞典和美國(guó)組成的研究組在室溫條件下，利用LCLSX射線激光器，成功解碼一種重要G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)的3D結(jié)構(gòu)。同時(shí)驗(yàn)證了LCLSX射線激光器的可行性。相關(guān)文章發(fā)表于2013年12月20日的《science》雜志上。Science：利用新技術(shù)在天然條件下成功獲得g蛋白偶聯(lián)受體3D結(jié)構(gòu)GPCR功能GPCR是一個(gè)蛋白大家族，對(duì)人類健康有關(guān)鍵性作用，約40%的現(xiàn)代藥物都靶標(biāo)這類蛋白。與GPCR有關(guān)的疾病包括，高血壓、哮喘、精神分裂癥和帕金森癥。由于這類蛋白的重要性，...

溶血空斑形成試驗(yàn)是一種體外檢測(cè)單個(gè)抗體形成細(xì)胞(漿細(xì)胞)的方法，故又稱體外抗體形成細(xì)胞(PlaqueFormingCell,PFC)測(cè)定技術(shù)。此項(xiàng)技術(shù)不僅可以作為免疫基本理論研究的有力工具，廣泛地用于檢測(cè)產(chǎn)生IgM類型(包括其它各類免疫球蛋白及其亞類)的抗體形成細(xì)胞，它還可作為研究篩選抗腫瘤新藥以及研究中藥對(duì)抗體免疫功能影響的免疫學(xué)指標(biāo)。一、原理：溶血空斑形成試驗(yàn)的基本原理是將經(jīng)綿羊紅細(xì)胞免疫小鼠的脾細(xì)胞與一定量的綿羊紅細(xì)胞混合，在補(bǔ)體參與下，使抗體形成細(xì)胞周圍那些受到抗體分...

案例一：DAB染色后切片著色一片黃/背景深背景：奧運(yùn)會(huì)期間我們課題組研究生都在實(shí)驗(yàn)室做實(shí)驗(yàn)，許多從北京購(gòu)買的試劑買不到，對(duì)我們的許多實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生了很大的影響。我以前一直用中杉金橋的Sp三步法染色試劑盒，效果不錯(cuò)，在奧運(yùn)會(huì)期間我準(zhǔn)備做同批實(shí)驗(yàn)分不同批次酶免疫組化實(shí)驗(yàn)，*批組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果很好，抗體濃度感覺(jué)比較合適(SantaCruz公司1：200)，等做第二批時(shí)發(fā)現(xiàn)封閉血清不夠了，為了保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行，我又從福州邁新頂了一個(gè)SP試劑盒，同時(shí)抗體稀釋液也不夠了，我又重新從博士德公司買了一...

實(shí)驗(yàn)原理：細(xì)胞中的DNA受1NHC1，60℃水解作用以后，核酸中的嘌呤堿很快*被除掉，使脫氧核糖中潛在的醛基獲得自由狀態(tài)。水解后，組織要經(jīng)水洗再移至希夫（Schiff）試劑中，希夫試劑即同露出來(lái)的醛基發(fā)生反應(yīng)，呈現(xiàn)紫紅色。這個(gè)反應(yīng)是Feulgen在1942年提出來(lái)的，是DNA的一個(gè)特異性檢查法。水解的時(shí)間很重要，因?yàn)楹怂岬乃庥袃蓚€(gè)過(guò)程，*，漂呤堿很快被除掉，脫氧核糖中潛在的醛基顯露出來(lái)，第二，組蛋白和核酸愈來(lái)愈多地被除掉。在短時(shí)間的水解作用以后，*個(gè)過(guò)程占優(yōu)勢(shì)，這時(shí)候用希夫...

本文討論的范圍包括RNA酶保護(hù)分析，northernblot，原位雜交，半定量RT-PCR和定量RT-PCR。本文不談具體protocol，是因?yàn)楦鞣N書籍和kit說(shuō)明書上都有，主要說(shuō)一些原則，而且大部分是失敗和成功的經(jīng)驗(yàn)，還有小組討論結(jié)果以及各種書里七零八落看的內(nèi)容，希望對(duì)大家有用。基因表達(dá)的定義：說(shuō)到基因表達(dá)，是指RNA，還是蛋白？是指mRNA還是包括風(fēng)頭正旺的非編碼RNA？mRNA還有不翻譯的RNA呢。應(yīng)該說(shuō)轉(zhuǎn)錄水平指的是RNA水平，而蛋白應(yīng)該叫翻譯水平？我們這里就特指編...

中文名：異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)英文名稱：Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside用途：異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是一種作用*的誘導(dǎo)劑,不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定,因此被實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用。IPTG常用于需要誘導(dǎo)β-半乳糖苷酶活性的克隆實(shí)驗(yàn)。它常與X-Gal或Bluo-Gal結(jié)合使用，用于重組細(xì)菌菌落的藍(lán)白篩選，這些菌落可以誘導(dǎo)lac操縱子在大腸桿菌中的表達(dá)。IPTG與lacI阻遏蛋白結(jié)合并改變其構(gòu)象而發(fā)揮作用，防止β-半乳糖苷...

一、原理植物激素（planthormone）免疫定量主要有放射免疫分析（RIA）和酶聯(lián)吸附免疫分析（ELISA），由于前者操作上欠安全等原因，目前常采用后一種類型。在ELISA中，抗原抗體反應(yīng)的檢測(cè)依靠酶標(biāo)記物來(lái)實(shí)現(xiàn)，常用的酶有辣根過(guò)氧化物酶和堿性磷酸酯酶。酶可直接標(biāo)記激素分子，稱為酶標(biāo)植物激素，也可標(biāo)記于第二抗體（識(shí)別抗激素抗體Fc片段的抗體或金黃色葡萄球菌A蛋白），稱為酶標(biāo)二抗。這兩類標(biāo)記物分別用于固相抗體型和固相抗原型ELISA。A.固相抗體型ELISA：將抗激素的單克...